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提取质粒DNA的质量和含量的鉴定方法

阅读次数：206 发布时间：2024/10/11 9:52:05

琼脂糖凝胶电泳是检测DNA质量的一种常用方法。‌ 它利用琼脂糖溶化再凝固后形成的固体基质，在电场作用下，带负电的DNA分子向阳迁移，不同大小和构型的DNA分子迁移速度不同，从而分离出不同的区带。这种方法不仅可用于分离不同分子量的DNA，还能分离相对分子质量相同但构型不同的DNA分子‌。

琼脂糖凝胶电泳的原理基于DNA分子在电场中的迁移特性。DNA分子在高于等电点的溶液中带负电荷，在电场中向正移动。迁移速度取决于DNA分子的分子量和构型，分子量越大，迁移速度越慢。琼脂糖凝胶的浓度也会影响DNA的迁移率，不同浓度的凝胶可以分离不同大小范围的DNA片段‌。

琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒DNA

琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应，DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正移动。

由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正方向移动。
不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp至50kb的DNA片段。在琼脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭(ethidum bromide ,EB)，在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带，在电场中，pH8.0条件下，凝胶中带负电荷的DNA向阳迁移。

质粒DNA提取方法
1，碱裂解法
2，煮沸裂解
3，羟基磷灰石柱层析法
4，质粒DNA释放法
5，酸酚法等。

选择哪一种方法取决于以下几个因素
1，质粒的大小
2，大肠杆菌菌株
3，裂解后用于纯化的技术和实验要求