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引物定量不准的原因

点击次数:118   发布时间:2023/1/6 11:16:28

引物定量不准,出现这种情况的可能性有:

(1)定量错误、分装错误、引物抽干或收样过程中意外丢失。这种可能性有,但是很少,因为作为业的引物合成公司,生产人员都是经过严格的业培训,这种错误是要求谨慎避免甚至杜绝的。一般情况下,引物都有留样备份,接到用户投诉后,都会找出留样重新定量,一般都没有问题,如确实存在问题,则可安排重新准备一份。

(2)系统误差,我们认为10%左右为允许误差。使用过程中,引物工作浓度范围很宽,定量上的少许偏差不影响实验。

(3)用户收到引物干粉时,打开引物管盖没有离心或其他误操作导致引物干粉部分丢失。

(4)用户没有能够正确理解引物OD数的含义,没有能够正确使用分光光度计,特别是使用微量测定;用户没有将OD读数,正确地转换成母液中OD数。这种情况比较常见。

例如,验证标2OD引物量是否准确,简单的做法是:加入1ml水,彻底溶解混匀后,取100ul,加入900ul水,用光径为1cm的石英比色杯,波长260nm,此时光吸收的读数为0.2。

引物定量不准,出现这种情况的可能性有:

(1)定量错误、分装错误、引物抽干或收样过程中意外丢失。这种可能性有,但是很少,因为作为业的引物合成公司,生产人员都是经过严格的业培训,这种错误是要求谨慎避免甚至杜绝的。一般情况下,引物都有留样备份,接到用户投诉后,都会找出留样重新定量,一般都没有问题,如确实存在问题,则可安排重新准备一份。

(2)系统误差,我们认为10%左右为允许误差。使用过程中,引物工作浓度范围很宽,定量上的少许偏差不影响实验。

(3)用户收到引物干粉时,打开引物管盖没有离心或其他误操作导致引物干粉部分丢失。

(4)用户没有能够正确理解引物OD数的含义,没有能够正确使用分光光度计,特别是使用微量测定;用户没有将OD读数,正确地转换成母液中OD数。这种情况比较常见。

例如,验证标2OD引物量是否准确,简单的做法是:加入1ml水,彻底溶解混匀后,取100ul,加入900ul水,用光径为1cm的石英比色杯,波长260nm,此时光吸收的读数为0.2。


原创作者:昆山远慕生物科技有限公司

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