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人αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISA检测试剂盒注意事项
人αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISA检测试剂盒产品简介：
别名：人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA Kit
供应商：上海岑特
规格：48t/96t
保存：2-8℃
有效期：6个月
产品特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的，且与其他相关蛋白无交叉反应。
产品实验设备：酶标仪， 37℃恒温箱，自动洗板机，可调节移液器以及其吸头，蒸馏水，干净的试管，容量瓶等。
产品应用领域：本elisa试剂盒限科研，严禁临床使用。
特点：灵敏性高、特异性强、重复性好。
检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法。
elisa试剂盒组成" src="http://img5.app17.com/EditImg/20170704/636347704309700000.jpg" width="600" height="425" />
人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA检测试剂盒组织结构：
1、 血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心23分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心60分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液：1000×g离心32分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心33分钟，取上清液。
5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
人αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISA检测试剂盒注意事项 问题解析：
1.试剂的选择：选择优良试剂大家都是知道的，但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻。
2.加样中可能遇到的问题：在做血清或是血浆用于检测试剂的时候，会碰到血清血浆不好分离的情况，这个时候的解决办法是先放在常温中1到2小时，然后在进行离心处理
3.洗板时容易造成误差： 因为洗板是人工洗的，所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的，这个时候带有主观色彩，所以多清洗几次，还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动
人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA试剂盒细胞裂解液裂解细胞之前，必须根据以下方向的测定。
1.贴壁细胞应分离胰蛋白酶和离心后收集(悬浮细胞将离心收集直接)。
2.洗细胞三次冷PBS。
3.悬浮细胞在PBS(1×)和细胞受超声处理4次(或≤冷冻细胞-20°C。用温和的混融细胞。3次重复冻结/解冻周期。)
4.在1500×g离心10分钟在2到8摄氏度去除细胞碎片。
5.细胞培养上清和其他生物液体在1000×g离心20分钟去除样品颗粒和即刻检测或者商店样品在-20°C或稀释后使用80oC。避免重复冻结/解冻循环。
人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA试剂盒操作流程：
1. 每孔分别加入已稀释的样品、标准品各100ul。
2. 将板置于37℃温育30分钟。
3. 甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。
4. 每孔加入酶标偶合液100ul。
5. 将板置于37℃温育30分钟。
6. 甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。
7. 每孔加底物A、底物B各50ul，置37℃恒温箱反应15分钟。
8.每孔加终止液50ul，于450nm波长读O.D.值。
人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA检测试剂盒液体类标本：
包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
1)血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2)血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
3)尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4)细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5)组织标本：
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
人αN已酰氨基葡糖苷酶（αNAG）ELISA检测试剂盒注意事项：
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
原创作者：上海岑特生物科技有限公司
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