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流式细胞术工作原理与实验步骤

阅读次数：205 发布时间：2024/10/29 9:42:35

流式细胞术原理

流式细胞术是一种细胞分析技术。

流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点，是当代的细胞定量分析技术。

流式细胞术是一种用于细胞计数、细胞分类、生物标志物检测和蛋白质工程的技术。将荧光标记或有自身固有荧光细胞悬液，通过喷嘴喷射出，以单细胞流动的液流，用波长可调的激光照射并逐一探测、记录和分析每一个细胞的荧光，能以每几千个细胞的速率，实时对这些细胞的物理或化学特征，进行多参数分析。

流式细胞术实验步骤：

1、制备细胞悬液，计数

2、分装，按照每个EP（1.5ml）管1-2*10 6个细胞分装，3500rpm，4度离心。

3、用100ulPBS重悬，加入10ul大鼠血清封闭，4度避光30min。

4、加入相应的荧光标记的抗体，混匀，避光，4度孵育30min。

5、加入1mlPBS洗两遍。

6、用200ul PBS重悬，经纱布过滤转至流式管，上检测。

细胞或者大小接近的颗粒物质都可以检测。

样本通过鞘液的输送，成单个队列依次通过激光束。样本事先可以根据检测需要被荧光标记，通过激光束的时候就会得到荧光信号，被记录下来。可以同时标记不同的荧光标记做不同的检查。优点就是可以在短时间内检测大量的样本（每几千个到几万个细胞）。

主要应用于各种生物医学研究和临床诊断。上通用的白细胞和淋巴瘤的诊断标准就是靠流式细胞仪的分型来确定的。