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粗提取植物DNA的实验步骤和原理

阅读次数：283 发布时间：2023/5/16 11:19:27

提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理：CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。步骤如下：

1）取材料，加液氮研磨成粉末状，迅速移入1.5 ml Eppendorf管中；

（2）加入800 μl的CTAB提取缓冲液，混匀（CTAB在65℃水浴预热），每5min轻轻震荡几次，20min后12000 r/min，离心15 min；

（3）小心吸取上清液，加入等体积的酚：氯仿（各400μl）溶液，混匀，4℃，12000 r/min，离心10 min；

（4）小心吸取上清液，加入等体积的氯仿，混匀，4℃，12000 r/min，离心10 min。

（5）重复步骤（4）1-2次，以蛋白层不出现为止；

（6）取上清，-20℃沉淀1h，4℃，12000 r/min，离心10 min；

（7）弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀2次；

（8）室温下干燥后（一般干燥5-15 min），溶于30-50 μl DEPC去离子水中，于-20℃或者-70℃下保存备用。