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细胞组织消化常用哪几种酶?
阅读次数:640 发布时间:2022/10/19 11:08:25
直接从生物体获取的组织,一般需要将其消化成单个细胞才能进行体外培养。这种直接从离体组织获得的细胞,更接近于生物体内的生活状态,且生物性状尚未发生很大改变,因此在药物筛选、细胞移植、类器官培养、肿瘤研究等众多域备受欢迎。但组织消化过程中常遇到多种问题,例如消化不完全、细胞死亡率高等。如何克服这些问题,其实消化酶的选择是关键。岑特生物将为您介绍一些常用的消化酶及其适用组织,供您参考。
组织消化过程中常用的酶
1.胰蛋白酶
胰蛋白酶(Trypsin)是目应用广泛的消化试剂,通过作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽腱,除去细胞间粘蛋白及糖蛋白,影响细胞骨架,从而使细胞分离。胰蛋白酶适用于消化细胞间质较少的软组织,如胚胎、上皮、肝、肾等组织。但对于纤维组织和较硬的癌组织的效果差,常常将胰蛋白酶与其他消化酶联合使用。EDTA可以用来增强胰蛋白酶的水解功能,而血清则会影响胰蛋白酶的活性。
2.胶原酶
胶原酶(Collagenase)通过水解细胞间质的脯氨酸,从而使细胞离散。胶原酶对胶原的消化作用很强,它仅对细胞间质有消化作用而对细胞损害不大,因此适于消化分离纤维性组织和较硬的癌组织。钙镁离子和血清不会对胶原酶的活性及消化作用产生影响。
胶原酶可细分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原酶,不同类型胶原酶适用范围不同。
3.透明质酸酶
透明质酸酶(Hyaluronidase)通过随机降解透明质酸的β-N-乙酰己糖胺-[1-4]糖苷键,从而降低透明质酸的活性,常与胶原酶等联合使用,用于结缔组织的分离。
4.脱氧核糖核酸酶Ⅰ
脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DeoxyribonucleaseⅠ, DNaseⅠ)作用于细胞分离降解出的DNA,防止DNA导致的细胞凝集,对细胞完整性无破坏作用。通常配合胶原酶或透明质酸酶等联合使用,不会单独使用。
5.中性蛋白酶
中性蛋白酶(Dispase)具有温和的蛋白酶水解活性,不会损坏细胞膜的完整性,常与胶原酶等联合使用,其分离纤维样组织的效率高于上皮组织。
6.弹性蛋白酶
弹性蛋白酶(Elastase)通过作用于弹性蛋白的肽键、酰胺键和酯键将其水解,常与胰蛋白酶和胶原酶等联合使用,用于分离结缔组织和含有大量细胞网状纤维的组织。
不同组织消化方案有所不同,同种组织的消化方案也不尽相同,考虑到组织的特殊性及酶的多样性,针对具体组织仍需试验摸索以确定佳消化方案。
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