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更换培养基培养细胞应注意的问题

阅读次数：425 发布时间：2022/2/16 10:46:26

能否使用细胞说明书上不同的培养基来培养细胞？

产品目录或者细胞说明书上的推荐的培养基一般是细胞株的原始提供者推荐的培养基或者已经经过验证的对该细胞株合适的培养基，细胞对未推荐的培养基也许会适应，也有可能不适应。对于更换培养基，应谨慎对待，更换培养基时，应留一瓶细胞使用推荐的培养基培养，留作种子。

更换培养基有两种方法，简单的方法是直接更换培养基，强制使细胞适应新的培养基；还有一种更温和的方法：传代细胞的时候分成细胞两瓶，瓶使用原来推荐的培养基，第二瓶使用50%原来推荐的培养基，50%新的培养基，之后仔细观察细胞的生长状态，如果第二瓶细胞生长状态不好，应立即停止更换培养基，如果第二瓶生长状态好，可以继续传代分瓶，一瓶使用50%原来推荐的培养基，50%新的培养基，另一瓶使用25%原来推荐的培养基，75%新的培养基，继续观察，如果细胞状态好，可以全部换成新鲜的培养基。

培养基实验需要遵循的三大原则

一、配制培原则
目的要明确，根据不同的微生物的营养要求配制针对强的培养基。自养型微生物能从简单的无机物合成自身需要的糖类、脂类、蛋白质、核酸、维生素等复杂的有机物，因此培养自养型微生物的培养基完全可以由简单的无机物组成。

二、操作要规范
细菌培养，要掌握温度、湿度、时间、环境等因素，微生物限度检验细菌培养温度为30~35℃，此温度适于中温菌生长，某些高温菌在该温度下也可以生长。药品污染的控制菌多是中温菌。根据不同菌株及检验目的选择不同的培养时间。根据细菌对环境要求不同常用培养方法如下
1.需氧培养法：此为常用的培养方法，适于需氧菌和兼性厌氧菌的培养。
2.厌氧培养法：厌氧菌的培养，必须在无氧的环境中进。
3.需氧培养法：有些细菌为微需氧菌在微需氧环境(5%02、10%CO2、85%N2)生长良好，微需氧培养法常用的有混合气体法、气袋法、双平板法、烛缸法这几种。

三、讲究经济节约
在配制培养基时应尽量利用价廉且易于获得的原料为培养基成分，特别在发酵工业中，培养基用量很大，利用低成本的原料更体现出其经济价值。如在微生物单细胞蛋白的工业生产中，常常用利用糖蜜、豆制品工业废液等作为培养基的原料，另外大量的农副产吕如麸皮、米糠、玉米浆、酵母浸膏、酒糟、豆饼、花生饼等都是常用的发酵工业原料。

培养基在使用过程中应注意的问题
（1）培养基在使用需37 oC预热或在室温平衡后再使用。
（2）细胞培养过程中，吸取过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，防止残留在吸管内的培养基焦化，将有害物质带入培养液中。
（3）尽量缩短各种液体、细胞的暴露时间。
（4）避免液体间、细胞间的交叉污染。
（5）配制完全培养基时，配制的量好在2周内用完为好。