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PCR实验耗材的选择也会影响实验结果？
阅读次数：469 发布时间：2022/1/14 11:46:23
关于PCR实验有哪些影响因素呢？我们一般想到的可能是获取的DNA/RNA质量、反转录的效率、引物的特异性乃至DNA聚合酶的保真度、扩增长度等问题，但很少有人会想到耗材的选择，可能也会影响您的实验结果。
我们一般想到的可能是获取的DNA/RNA质量、反转录的效率、引物的特异性乃至DNA聚合酶的保真度、扩增长度等问题，但很少有人会想到耗材的选择，可能也会影响您的实验结果。那么关于PCR实验耗材我们改如何选择呢？
-先需要明确的是我们做的是哪种PCR实验。根据检测方法的不同，PCR实验分为普通PCR法和荧光定量PCR法，者一般是终点PCR跑胶法测定，所以在选择耗材时需要关注的主要是耗材本身的导热性和密封性；而后者是实时检测荧光信号，除了导热性和密封性外，对透光性和避光性也有所要求。换句话而言，可以做荧光定量PCR的耗材一定可以来做普通PCR，反之，效果却会差很多！
确定好了实验类型，我们就可以选择耗材了，如面所述，我们知道了密封性、导热性、透光性、避光性等因素是我们需要关注的，那为什么要关注这些呢？
一、密封性
密封性越好，产物的挥发越少，得到的产物就越多同时气溶胶的产生也越少，对于下一轮实验的污染也就越少，也就意味着假阳性的产生率越低。
二、导热性
导热性越好越均一，PCR的速度就越快，准确度也越高。
三、透光性
这主要是对于荧光定量而言，我们知道它是一种实时定量的方式，那么耗材本身的透光性就直接关系到我们检测到的荧光信号多少，如果选择耗材透光性不足，本该检测到的信号检测不到，那就会造成我们对结果的误判。
四、避光性
这也是针对荧光定量而言的，同上面的因素，如果我们在整个实验过程中没注意避光，带有荧光的试剂过度被消耗，那直接就会影响我们实验的扩增效率，导致不准确的结果产生。
我们一般想到的可能是获取的DNA/RNA质量、反转录的效率、引物的特异性乃至DNA聚合酶的保真度、扩增长度等问题，但很少有人会想到耗材的选择，可能也会影响您的实验结果。那么关于PCR实验耗材我们改如何选择呢？
-先需要明确的是我们做的是哪种PCR实验。根据检测方法的不同，PCR实验分为普通PCR法和荧光定量PCR法，者一般是终点PCR跑胶法测定，所以在选择耗材时需要关注的主要是耗材本身的导热性和密封性；而后者是实时检测荧光信号，除了导热性和密封性外，对透光性和避光性也有所要求。换句话而言，可以做荧光定量PCR的耗材一定可以来做普通PCR，反之，效果却会差很多！
确定好了实验类型，我们就可以选择耗材了，如面所述，我们知道了密封性、导热性、透光性、避光性等因素是我们需要关注的，那为什么要关注这些呢？
一、密封性
密封性越好，产物的挥发越少，得到的产物就越多同时气溶胶的产生也越少，对于下一轮实验的污染也就越少，也就意味着假阳性的产生率越低。
二、导热性
导热性越好越均一，PCR的速度就越快，准确度也越高。
三、透光性
这主要是对于荧光定量而言，我们知道它是一种实时定量的方式，那么耗材本身的透光性就直接关系到我们检测到的荧光信号多少，如果选择耗材透光性不足，本该检测到的信号检测不到，那就会造成我们对结果的误判。
四、避光性
这也是针对荧光定量而言的，同上面的因素，如果我们在整个实验过程中没注意避光，带有荧光的试剂过度被消耗，那直接就会影响我们实验的扩增效率，导致不准确的结果产生。
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