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金标免疫层析法与荧光免疫层析法有何区别

阅读次数：784 发布时间：2022/1/13 11:16:34

荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应的新型膜检测技术。该技术以固定有检测线(包被抗体或包被抗原)和质控线(抗抗体)的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，荧光标记抗体或抗原固定于连接垫，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。对于带有多个抗原决定簇的大分子抗原(蛋白、病毒、致病菌等)，通常采用“三明治”型双抗夹心免疫层析方法，即待测物在流动相作用下先与荧光标记抗体结合，当到达检测线时再与包被抗体结合形成双抗夹心的“三明治”型。对于只具有单一抗原表位的小分子抗原(农兽药、违禁药物等)，待测小分子抗原与荧光标记抗体结合后，由于空间位阻作用难以再与检测线上的包被抗体结合。所以，具有单一抗原表位的小分子待测物多采用竞争免疫层析法检测。

酶免法是酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA)，它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。用酶与指示剂的反应来放大信号便于检测。

就是用酶标记抗原或抗体，抗原抗体反应后加入酶的指示剂(酶的底物反应后会显色)，颜色的深浅与抗原或抗体的量成正比。

金标法也是标记免疫的方法，用来作标记物的是胶体金(氯金酸在还原剂的作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称为胶体金。)分为层析法和斑点渗透法。

以层析法为例:层析法一般采用双抗原夹心法免疫测定原理，选择经纯化的基因工程制备的抗原，分别作为包被抗原和胶体金结合抗原。当待检标本中含有HIV抗体时，先和金标记抗原结合，由于层析作用反应复合物沿硝酸纤维膜向移动，当遇到包被抗原时，形成Ag-Ab-Ag-Au复合物富集在包被线上，形成红色沉淀线。在包被膜上还有一条质控线对照，故当有两条红线时判为阳性，只有一条红线时，判为阴性。