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细胞迁移和细胞侵袭检测方案

阅读次数：501 发布时间：2021/5/20 11:48:48

细胞迁移是正常细胞的基本功能之，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。因此通过对细胞迁移（包括细胞侵袭）的研究，对阻止癌症转移、异体植皮等医学应用方面具有定意义。

细胞迁移分析通常在细胞培养物中开展，目流行的方法主要有：Boyden小室（跨膜法）、间隙封闭分析（gap-closure assay）等。

Boyden小室法：

Boyden小室由上、下两室组成，中间以微孔滤膜隔开。将趋化剂加入下室中，形成梯度，而细胞接种在上室中。细胞放置在其中个室内，或接种在膜的面，将要研究的趋化试剂或抑制剂放置于另室内。受趋化剂影响，细胞会穿过膜上的微孔从上室移动到下室。之后，通过固定、染色和观察，穿过膜的细胞数就可以在显微镜下进行检测。这种分析方法的优点是可用于分析贴壁或不贴壁细胞，并可检测趋化梯度下的迁移。缺点是趋化试剂的浓度梯度不可知且是变化的，所以这种分析传统上大多只用于终点法，不适用于实时动态迁移。需要注意的是，我们必须选择比细胞直径略小的滤膜孔径。如果细胞在梯度的刺激下，它们会拼命挤过去。般来说，3um的孔径适合白细胞或淋巴细胞迁移。5um的孔径适合成纤维细胞或癌细胞，也适合单核细胞和巨噬细胞。而8um的孔径适合大多数细胞，这孔径支持大多数上皮细胞和成纤维细胞的蕞佳迁移，但不适合淋巴细胞。

细胞迁移类型分为三类：趋化性、趋触性，以及细胞转移。其特点分别如下：

1、趋化性：细胞向周围环境中的趋化因子迁移

2、趋触性：细胞沿细胞外基质的梯度方向迁移

3、细胞转移：细胞通过血管内皮向趋化因子的迁移

在细胞侵袭中，细胞需要破坏或调节细胞外基质（ECM）。在Boyden分析中加入层ECM蛋白，即可将细胞迁移分析转换成侵袭分析，岑特可提供包被不同ECM单组分及全组分ECM的细胞侵袭检测试剂盒。

间隙封闭分析：

让细胞在孔的底部围绕个阻止细胞生长的区域（如在孔底部中央放置阻塞物）生长。试验在移除阻塞物后开始，可观察单层细胞迁移到原先的空白区域中。优点是可以对细胞迁移进行实时监测，避免与创伤相关的因子可能造成的复杂性。另外，可在细胞层上加层基质，进行3维细胞迁移的分析。这种方法操作简单且重复性好，以简单方便的形式精准地监则细胞迁移，既可用于终点法，也可用于实时动态迁移的分析。缺点是这种方法不能分析不贴壁细胞及趋化梯度下的细胞迁移。