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经典的荧光抗体技术基本原理

阅读次数：523 发布时间：2021/4/13 10:46:32

1. 直接法
直接法是荧光抗体技术简单、基本的方法。它通过标记抗体直接与相应抗原（待检抗原标本）结合，来鉴定未知抗原。
其优点为：
①由于在反应中只有两种因子参与，结果判断较简单；
②特异性强，与其他抗原交叉染色较少；
③操作步骤少，方法简便、省时。
其缺点有；
①敏感性较差；
②种标记抗体只能鉴定种抗原；
③不能用于鉴定未知抗体。

2. 间接法
间接法是目常用的方法。先用已知未标记的抗体（第抗体）与待检抗原反应或用未知抗体与已知抗原反应，反应定时间后，洗去未结合的抗体，再与标记的抗免疫球蛋白抗体（二抗）反应。在第步反应中，若抗原抗体发生了反应，则抗体被固定在标本上，那么第二步反应中标记的抗体（二抗）必然与第步反应形成的抗原抗体复合物中的抗体发生反应，这样就可以通过二抗的示踪，对标本中未知抗原或抗体进行鉴定。
其优点为；
①敏感性较高，是直接法的5-10倍；
②用种标记的抗体，就能与种以上的相应的抗体或抗原配合鉴定多种未知的抗原或抗体；
③既能鉴定未知抗原，又能鉴定未知抗体。
其缺点有
①在反应中有多种因子参与，容易产生非特异性染色，结果判断有时较困难；
②操作步骤多，费时。

3. 双标记法
双标记法是用两种荧光素（常用FITC和PE）分别标记特异性不同的抗体，用于检测同标本中的不同抗原。此法常用于细胞表面抗原和受体的研究。