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岑特实验：还原糖含量测定！

阅读次数：490 发布时间：2020/11/26 10:53:16

实验方法原理：还原糖是具有羰基（>C=O）的糖，能将其它物质还原而其本身被氧化。

（1）还原糖在碱性条件及有酒石酸钾钠存在下加热，可以定量地还原二价铜离子为一价铜离子，产生砖红色的氧化亚铜沉淀，其本身被氧化。具体反应如下：

（2）氧化亚铜在酸性条件下，可将钼酸铵还原，还原型的钼酸铵再与砷-酸氢二钠起作用，生成一种蓝色复合砷钼蓝，其颜色深浅在一定范围内与还原糖的含量（即被还原的Cu2O 量）成正比，用标准葡萄糖与砷钼酸作用，比色后做标准，就可测得样品还原糖含量。

实验材料植物材料

试剂、试剂盒铜试剂砷钼酸试剂标准葡萄糖原液

仪器、耗材分光光度计具塞刻度试管水浴锅刻度吸管容量瓶漏斗研钵

实验步骤：

1.标准曲线的制作：

在一系列刻度试管中，分别加入200μg/mL 标准葡萄糖0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5及0.6 mL，再顺序加入蒸馏水2、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5 及1.4 mL，配成浓度分别为0、10、20、30、40、50 及60μg/mL 的系列葡萄糖溶液。每试管加入铜试剂2mL，混匀后沸水浴中加热10min，立即冷却，再加入2mL 砷钼酸试剂，振荡两分钟后稀释到20mL,用分光光度计在620nm 波长下比色，测其光密度OD620nm（做一式两份）。以糖浓度微克数为横坐标，光密度OD620nm 为纵坐标，绘制标准曲线。

2.植物样品中还原糖的提取：

将样品洗净，吸干其表面水分，切碎混匀，称取1g 放入研钵中，加入约0.5g 石英砂，磨成匀浆，加水将样品由玻璃漏斗冲入100mL 容量瓶中，加水达70-80mL，摇匀后置于80℃恒温水浴上浸提0.5h。

待上述样品冷却后，沉淀蛋白质，加入5%硫酸锌5mL，再慢慢滴入0.3mol/L Ba(OH)2 5mL，以沉淀蛋白质。振荡后静置，至上层出现清液后再加一滴Ba(OH)2,直至无白色沉淀时，向容量瓶加水至刻度。

3.还原糖含量的测定：

过滤上述已定容的样品液，取5mL 滤液，再定容到100mL（此步视样品的含糖量而定）。取已稀释的溶液2mL，与标准葡萄糖显色法相同：加铜试剂2mL，煮沸10min，加砷钼酸试剂2mL，振荡2mL，定容到15ml，620nm 波长下比色，记下光密度OD620nm（至少重复两次）。

注意事项：比色皿的外面应被擦干净。

其他： OD是当光经过一个样本时，部分光会被吸收。在光谱学，透光率是出射光和入射光强度的比。