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免疫共沉淀实验的注意事项

阅读次数：594 发布时间：2020/10/30 9:56:57

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。那么免疫共沉淀实验的注意事项有哪些呢？古朵生物为您介绍一下：

1、细胞裂解采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质相互作用，多采用非离子变性剂（NP40 或 Triton X-100）。每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。不能用高浓度的变性剂（0.2％ SDS），细胞裂解液中要加各种酶抑制剂，如商品化的 cocktailer。

2、使用明确的抗体，可以将几种抗体共同使用。

3、使用对照抗体：

① 单克隆抗体：正常小鼠的 IgG 或另一类单抗

② 兔多克隆抗体：正常兔 IgG

4、在免疫共沉淀实验中要保证实验结果的真实性，应注意以下几点：

① 确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的，而并非外源非特异蛋白，单克隆抗体的使用有助于避免污染的发生。

② 要确保抗体的特异性，即在不表达抗原的细胞溶解物中添加抗体后不会引起共沉淀。

③ 确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中，而不是由于细胞的溶解才发生的，这需要进行蛋白质的定位来确定。