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怎么建稳转株才能真的稳？岑特新闻√

阅读次数：441 发布时间：2020/8/19 11:27:34

    稳定转染，即进入细胞的质粒整合入细胞基因组中，并能随细胞分裂稳定传递下去。这是相对瞬时转染而言的。

    瞬时转染的表达时间短暂，外源基因导入整合基因组的几率非常低，绝大部分以游离形式存在，不能随细胞分裂而一同复制，导致*后拷贝数被稀释，无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染，多为瞬时转染。

    一般如下情况需要构建稳定株

    1. 长期在目的细胞中研究基因功能，通过构建稳定株，可以大大降低频繁转染或者病毒包装的成本，也极大方便实验研究；

    2. 部分蛋白半衰期极长，瞬时 RNA 只能干扰表达，无法去除已经表达的目的蛋白，通过构建稳定株可以实现更好的基因干扰效果；

    3. 瞬转往往会引入极高拷贝数的表达，导致因为人为因素造成实验结果的不精确，构建稳定株可以帮助筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究；

    4. 需要用诱导表达系统的，主要是一些致死基因或者是需要时空表达的；

    5. 需要用细胞做动物实验的，比如裸鼠成瘤等，往往需要构建成稳转株。

    构建稳定株的方法

    其实用脂质体转染、磷酸钙转染法等理论上是可以构建稳定株的，但这些方法整合入基因组的效率极低，很难成功。而慢病毒可以携带外源基因随机整合进基因组，效率很高，是建立稳定株的*优方式。