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做转染实验，别忽视质粒中内毒素

阅读次数：466 发布时间：2020/7/2 10:18:18

什么是内毒素？

细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（LipopolySaccharide,LPS）和蛋白的复合物，当细菌裂解时便会大量释放出来。内毒素单位为EU。

内毒素对试验的影响

内毒素存在极大程度地影响转染效率。同时内毒素还可能激活免疫细胞的非特异反应，造成实验中的假阳性。因此，为了保证高转染率和转染细胞高存活率，必须从质粒制备的过程中将内毒素去除。

内毒素和质粒的关系

由于内毒素两亲性和负电荷性，性质类似于DNA，因此在质粒纯化中会伴随质粒一同被纯化出来。质粒中内毒素含量的高低常用EU/µg质粒表示。

按照EU/µg大小，质粒被分为三个级别：测序级别（>50EU/µg）、转染级别(<50EU/µg)和无内毒素级别(<0.1EU/µg)。

再次强调

当你提取的质粒DNA是为了转染原代细胞、悬浮细胞或者敏感细胞；进行基因沉默研究、细胞注射显微操作；进行基因治疗或者DNA疫苗等要求极为严格的实验，就应该考虑Endotoxin-Free的质粒。

2017年3月，张锋课题组在《Nature Protocols》发表的《Genome-scaleCRISPR-Cas9 knockout ａnd transcriptional activation screening》中，Endotoxin-Free的质粒获得被列为 Critical Step，同时推荐该厂家的NucleoBond Endotoxin Free Plasmid DNA kit，可避免病毒包装和细胞培养过程中减少了内毒素残留的影响。