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细胞培养室的那些事儿：消灭细胞污染
阅读次数：487 发布时间：2020/6/10 11:03:09
当清晨的阳光满照大地时，在细胞培养室的角落，倒置显微镜旁，总会聚集着几个孩纸，时不时的各种感慨。啊……细胞又长满了！咦……细胞咋飘了好多？唉……这个细胞状态好差，能不能长起来？完了完了，细胞污染了……
各种细胞，总会有各样问题让人猝不及防。
虽说细胞培养是基础性的技术，但并不是每个人都能把每种细胞养的很好呢！
今天小编就来说说细胞培养室里细胞污染的事儿。
常见的细胞污染除了来自其它细胞系的交叉污染外，包括支原体、细菌、真菌污染。这些微生物污染对细胞产生的影响很大呢！例如，它们会与宿主细胞竞争营养；分泌酸性或碱性的副产物，使宿主细胞停止生长；产生对细胞直接有毒的H2O2等等。
有同学说，我使用了无菌的试剂和耗材，也遵循了无菌操作的要求，然而……还是莫名污染了。隔壁的同学还没有我做的仔细呢！
那么，这种情形下，细胞到底为什么会污染呢?细胞污染要怎么办呢？
小编觉得此同学和彼同学，的差异恐怕是操作环境了。给大家提个醒，细胞培养室的环境控制尤为重要啦。
有这样一篇文献,作者对比了正常细胞培养室和污染培养室，在可能污染的位置放了血培养皿，根据微生物的生长状况，研究细胞污染的原因。以下是代表性的培养结果。
污染物是毋庸置疑的源头，培养室的空气、培养箱内循环的空气、培养箱的层架以及显微镜的载物台和物镜都可能是污染源。
其实，特别容易成为污染源的地方有这么几个：
1）空调（估计是细胞培养室没有做层流，也不经常清洗）。
2）生物安全柜的空气过滤系统。
3）生物安全柜的进风口（如下图黄线圈出的位置，操作不慎的话，很容易把培养基或者血清之类的东西滴进这个风口，里面长个霉什么的都是正常的，因为你不会及时拆开清理）。
4）显微镜（一般也不会有人用84擦显微镜吧）
5）培养箱的水盘和复苏细胞用的水浴锅（基本上是温床，但是可以在里面加入硫酸铜，并且周期性更换来避免长菌，但问题是硫酸铜会损伤不锈钢）。
6）离心机（也是重灾区）。
7）液氮罐（这个估计大家都不会注意的，但好在液氮罐污染可能性比较低）。
如果出现细胞污染的情况，劝你直接加入84，灭活以后丢弃。万一不幸，真菌肆虐，细胞培养室还要用甲醛熏蒸。
但是，你的细胞特别珍贵，污染了，怎么办？那就要用抗生素了！
1）、*常用：青霉素、链霉素联合抑制细菌，即所谓的“双抗”，主要针对革兰氏阳性菌、阴性菌；对于细菌的感染也可用庆大或卡那霉素；
2）、如果真菌污染严重，可用两性霉素／制霉菌素控制；
3）、若为支原体污染，可用庆大霉素／四环素／红霉素；
注意，抑制真菌的抗生素，对细胞都有比较大的伤害。使用前，一般都建议先做预实验，估计对细胞本身的影响。
另外，有一种叫Primocin的抗生素，是专门设计用于保护原代细胞免受微生物污染的抗生素，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、支原体和真菌均有杀伤作用。Primocin对原代细胞没有毒性，因为其作用的靶标只存在于微生物上。其中细菌的靶标为DNA解旋酶和原核细胞核糖体亚基30S和50S；真菌的靶标为麦角固醇（一种只发现于真菌和酵母细胞膜的分子）。其推荐使用浓度为100mg/ml，无需添加青霉素/链霉素。
今天，你的细胞还好么？
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