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如何学会分离培养人的真皮成纤维细胞？

阅读次数：636 发布时间：2018/11/12 10:59:42

真皮成纤维细胞（又称皮肤成纤维细胞）属于由中胚层分化而来的间质细胞。细胞来源于人正常的皮肤组织，真皮成纤维细胞是一种贴壁培养方式的细胞，由于这些细胞非常容易培养，它们已经被广泛用于细胞和分子生物学研究中。

一般而言，成纤维细胞能够分泌I型和 III 型胶原等细胞外基质，并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。

伤口修复时，真皮成纤维细胞由可增殖，可迁移的表型变为有收缩性的，可重塑基质的表型，同时，它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。

以下是古朵提供的一种人真皮成纤维细胞的制备方式（仅供参考）：

    首先在分离真皮成纤维细胞时要做到在无菌条件下进行，打开生物安全柜紫外灯 30min 作无菌处理。

    将手术废弃的皮肤组织浸泡 75% 酒精，消毒 2min，

    将皮肤组织置含 P/S 的 PBS 中清洗至少 3 遍，

    然后用眼科剪除去脂肪及结缔组织等，

    将皮肤剪成 0.5*0.5 cm 小块，放入 dish 中，加 0.1% 的 dispase 溶液，封口膜封口，4℃ 冰箱过夜消化，

    第二天，用镊子将表皮与真皮分开（薄的那层是表皮，厚的那层是真皮），

    将真皮剪碎，移至离心管，用 0.1% 胶原 Ⅰ 型酶+0.1% 胶原Ⅱ型酶+0.1% 胶原Ⅳ型酶+ 37℃ 水浴锅中消化至少 2 h（视消化程度而定），

    用 100 μm 网筛过滤，

    取滤液，300 g，离心5 min，

    用完全培养基重悬沉淀，

    铺瓶，

    隔天换液。

以上是皮肤成纤维细胞分离培养的一种方式，不同的技术人员分离培养的方法也不同，使用的试剂比例也不尽相同，皮肤成纤维细胞特异性纤维连接蛋白或波形蛋白表达检测，采用细胞免疫荧光技术。细胞纯度可高达于 90%，所有的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。