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浅谈蛋白质提取纯化的这几种方法
点击次数:302 发布时间:2022/6/14 14:05:15
蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛,要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。
根据蛋白质溶解度不同,蛋白质的分离纯化可分为盐析法和等电点沉淀法。盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使溶解的物质析出的过程。如:向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出。这是一种物理变化,可复原。
等电点沉淀法是利用蛋白质在等电点时溶解度/低而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离提取的方法。在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度小,易形成沉淀物。等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小,从而有利于悬浮液的过滤。
需要注意的是,不同的蛋白质,具有不同的等电点。在生产过程中应根据分离要求,除去目的产物之外的杂蛋白;若目的产物也是蛋白质,且等电点较高时,可先除去低于等电点的杂蛋白。同一种蛋白质在不同条件下,等电点不同。
蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛,要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。
根据蛋白质溶解度不同,蛋白质的分离纯化可分为盐析法和等电点沉淀法。盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使溶解的物质析出的过程。如:向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出。这是一种物理变化,可复原。
等电点沉淀法是利用蛋白质在等电点时溶解度/低而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离提取的方法。在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度小,易形成沉淀物。等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小,从而有利于悬浮液的过滤。
需要注意的是,不同的蛋白质,具有不同的等电点。在生产过程中应根据分离要求,除去目的产物之外的杂蛋白;若目的产物也是蛋白质,且等电点较高时,可先除去低于等电点的杂蛋白。同一种蛋白质在不同条件下,等电点不同。
原创作者:上海岑特生物科技有限公司
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