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细胞冻存液的配方你知道吗
点击次数：272 发布时间：2022/6/6 13:10:32
伴随着科技进步持续的发展趋势，医学技术也在持续提高。两年冷冻人的恶性事件让眼一亮，原先不仅是食材能够冷藏储存，就连身体也可以冷藏储存。假如要想做到那样的目地，那麼就需要体细胞冷冻液，这类东西如何配备呢?下边就来实际的了解一下，细胞冻存液的秘方是啥？
细胞冻存液的配方是什么？
(一)细胞冻存
1. 配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的冻存细胞培养液;
2. 取对数成长期的体细胞，除去旧细胞培养液，用PBS清理。
3. 除去PBS，添加适量蛋白酶(遮盖细胞培养皿表层)把单面生长发育的体细胞消化吸收出来;
4. 抽滤1000rpm，5min;
5. 除去蛋白酶，添加适量配置好的冻存细胞培养液，用塑料吸管轻轻地吹打使体细胞匀称，记数，调整冻存液中体细胞的后相对密度为5牙周106/ml～1牙周107/ml;
6. 将体细胞分装进冻存管中，每管1～1.5 ml;
7. 在冻存管上标出体细胞的名字，冻存時间及作业者;
8. 冻存：标准的冻存程序流程为减温速度-1～-2℃/min;当溫度达-25℃下列时，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃时，则可快速渗入液态氮中。也可将配有体细胞的冻存管放进-20℃电冰箱2h，随后放进-70℃电冰箱中留宿，取下冻存管，移进液氮容器内。
(二) 细胞复苏
1. 从液氮容器中取下冻存管，立即渗入37℃温开水中，并时常摇晃令其尽早溶化。
2. 从37℃水浴中取下冻存管，开启外盖，用塑料吸管吸出来体细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上细胞培养液，搅拌;
3. 抽滤， 1000rpm，5min;
4. 弃去上清液，添加含10%小牛血清细胞培养液重悬体细胞，记数，调节体细胞相对密度，打疫苗塑造瓶，37℃恒温箱静放塑造;
5. 隔日拆换一次细胞培养液，再次塑造。
常见问题
1.从繁衍期到产生高密度的单层细胞之的塑造体细胞都能够用以冻存，但zui好是为多数成长期体细胞。在冻存一天*是换一次细胞培养液;
2.将冻存管放进液氮容器或从这当中取下时，要搞好安全防护工作中，以防冻伤;
3.冻存和再生zui好用新配置的细胞培养液。
原创作者：上海岑特生物科技有限公司
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