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浓缩蛋白质的储存小技巧你知道吗
点击次数：379 发布时间：2021/11/23 11:35:39
蛋白质是非常敏感的，即使已经提取浓缩，在储存时仍然会发生降解、聚合和失活。如下分析几种保存方法的优缺点和一些小技巧，在储存时应根据自己的蛋白和实验需求选择适合自己的方法，权衡利弊，以免造成实验的麻烦。下面跟随古朵生物一起了解下吧！
1.储存在4°C溶液
将浓缩蛋白质储存在单一溶液（如PBS），置于聚丙烯管或干净的玻璃容器中，放在4°C冰箱保存。
优点：蛋白容易获得，可以快速进行实验，且同一管样品可重复取样，这样避免了因经常解冻而加速蛋白的降解。
缺点：在重复取样时，温度升高且暴露于环境中，可能会导致微生物污染，蛋白质失活和氧化。要避免这种情况，可以把蛋白质分成小份储存，并加入蛋白酶抑制剂、抗菌剂和还原剂等。但也要根据自己蛋白的情况，如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子内存在二硫键，为保-证其完整性，应该存储在氧化环境中。另外，储存时间超过一个月的蛋白可以考虑扔掉。
2.储存在-20°C，加入冷冻保护剂
可以将蛋白保存在含有25-50% (w/v) 甘油或乙二醇溶液中。
优点：在低温下，蛋白质对微生物污染，蛋白酶降解和氧化反应更有抵抗力，容易保-证其活性。用甘油或乙二醇稀释使蛋白处于溶液中，可以方便取样。此外，这种方式储存的蛋白质可以保存长达一年，对于抗体轭合物是一个好的选择。
缺点： 蛋白质在-20°溶液中仍有可能遭受水解、污染和氧化，也需加入抑制剂、还原剂等。而且将样品存放在50%冷冻保护剂中有时是不可取的，取决于你接下来要做的实验。
3.冻存在-80°C或液氮中
将蛋白质分装成一次使用的量，快速冷冻。
优点：可以长-期保存（多年)，不需要甘油、叠氮化钠等化学物质，避免蛋白质降解或微生物污染。
缺点：冷冻蛋白质应一次性使用，为了避免反复冻融发生降解。此外,抗体轭合物(特别是碱性磷酸酶复合物)冷冻后可能会失活。
4.冻干粉末
将你的蛋白质脱水冻干成粉末，在冰箱中无限期存放。
优点：蛋白质不会像在水溶液中发生会水解和其他形式的化学降解，冻干蛋白质的空间也比溶液要小，而且可以长-期储存。
缺点：冻干并不适用于所有蛋白质，与细胞膜相关的蛋白质容易被冻干破坏。而且，并非所有的蛋白质都冻干后都能保持稳定性，有的可能会变性，从而减少它们的有用性和再溶解的能力。此外，一些蛋白质可能需要与蔗糖、甘露醇或BSA等才能保持稳定。
六个储存小技巧：
1.无论是冷冻还是储存在溶液中，将蛋白进行分装，以避免冻融，降低污染的风险。
2.低浓度蛋白能更好地与塑料或玻璃结合，将蛋白浓缩至1mg/ml以上，,或添加BSA等减少这种结合。
3.添加乙二醇或甘油等保护剂，使蛋白稳定，防止结冰。。
4.抑制微生物的生长，添加硫柳汞01%(w / v)或叠氮化钠0.05%(w / v)。
5.添加EDTA 、PMSF等蛋白酶抑制剂来减少蛋白质降解。
6.阻止半胱氨酸氧化，可以加入1-5mM还原剂，例如DTT。
1.储存在4°C溶液
将浓缩蛋白质储存在单一溶液（如PBS），置于聚丙烯管或干净的玻璃容器中，放在4°C冰箱保存。
优点：蛋白容易获得，可以快速进行实验，且同一管样品可重复取样，这样避免了因经常解冻而加速蛋白的降解。
缺点：在重复取样时，温度升高且暴露于环境中，可能会导致微生物污染，蛋白质失活和氧化。要避免这种情况，可以把蛋白质分成小份储存，并加入蛋白酶抑制剂、抗菌剂和还原剂等。但也要根据自己蛋白的情况，如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子内存在二硫键，为保-证其完整性，应该存储在氧化环境中。另外，储存时间超过一个月的蛋白可以考虑扔掉。
2.储存在-20°C，加入冷冻保护剂
可以将蛋白保存在含有25-50% (w/v) 甘油或乙二醇溶液中。
优点：在低温下，蛋白质对微生物污染，蛋白酶降解和氧化反应更有抵抗力，容易保-证其活性。用甘油或乙二醇稀释使蛋白处于溶液中，可以方便取样。此外，这种方式储存的蛋白质可以保存长达一年，对于抗体轭合物是一个好的选择。
缺点： 蛋白质在-20°溶液中仍有可能遭受水解、污染和氧化，也需加入抑制剂、还原剂等。而且将样品存放在50%冷冻保护剂中有时是不可取的，取决于你接下来要做的实验。
3.冻存在-80°C或液氮中
将蛋白质分装成一次使用的量，快速冷冻。
优点：可以长-期保存（多年)，不需要甘油、叠氮化钠等化学物质，避免蛋白质降解或微生物污染。
缺点：冷冻蛋白质应一次性使用，为了避免反复冻融发生降解。此外,抗体轭合物(特别是碱性磷酸酶复合物)冷冻后可能会失活。
4.冻干粉末
将你的蛋白质脱水冻干成粉末，在冰箱中无限期存放。
优点：蛋白质不会像在水溶液中发生会水解和其他形式的化学降解，冻干蛋白质的空间也比溶液要小，而且可以长-期储存。
缺点：冻干并不适用于所有蛋白质，与细胞膜相关的蛋白质容易被冻干破坏。而且，并非所有的蛋白质都冻干后都能保持稳定性，有的可能会变性，从而减少它们的有用性和再溶解的能力。此外，一些蛋白质可能需要与蔗糖、甘露醇或BSA等才能保持稳定。
六个储存小技巧：
1.无论是冷冻还是储存在溶液中，将蛋白进行分装，以避免冻融，降低污染的风险。
2.低浓度蛋白能更好地与塑料或玻璃结合，将蛋白浓缩至1mg/ml以上，,或添加BSA等减少这种结合。
3.添加乙二醇或甘油等保护剂，使蛋白稳定，防止结冰。。
4.抑制微生物的生长，添加硫柳汞01%(w / v)或叠氮化钠0.05%(w / v)。
5.添加EDTA 、PMSF等蛋白酶抑制剂来减少蛋白质降解。
6.阻止半胱氨酸氧化，可以加入1-5mM还原剂，例如DTT。
原创作者：上海岑特生物科技有限公司
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