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蛋白质分离纯化也可以很简单！

点击次数：81 发布时间：2024/3/4 10:57:51

　　蛋白质的分离纯化方法：

　　一、根据蛋白质溶解度不同的分离方法

1、蛋白质的盐析法：中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析。

2、等电点沉淀法：蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力小，因而溶解度也小，各种蛋白质的等电点有差别，可利用调节溶液的ph达到某一蛋白质的等电点使之沉淀，但此法很少单独使用，可与盐析法结合用。

3、低温有机溶剂沉淀法：用与水可混溶的有机溶剂，甲醇，乙醇或丙酮，可使多数蛋白质溶解度降低并析出，此法分辨力比盐析高，但蛋白质较易变性，应在低温下进行。

　　二、根据蛋白质分子大小的差别的分离方法

1、透析与超滤：透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。超滤法是利用高压力或离心力，强使水和其他小的溶质分子通过半透膜，而蛋白质留在膜上，可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质。

2、凝胶过滤法：也称分子排阻层析或分子筛层析，这是根据分子大小分离蛋白质混合物有效的方法。柱中常用的填充材料是葡萄糖凝胶（sephadexged）和琼脂糖凝胶（agaroseel）。

　　三、根据蛋白质带电性质进行分离

1、电泳法：各种蛋白质在同一ph条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。值得重视的是等电聚焦电泳，这是利用一种两性电解质作为载体，电泳时两性电解质形成一个由正到负逐渐增加的ph梯度，当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时，到达各自等电点的ph位置就停止，此法可用于分析和制备各种蛋白质。

2、离子交换层析法：离子交换剂有阳离子交换剂（如：羧甲基纤维素；cm-纤维素）和阴离子交换剂（二乙氨基乙基纤维素），当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时，带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上，随后用改变ph或离子强度办法将吸附的蛋白质洗脱下来。

　　四、根据配体特异性的分离方法－亲和色谱法

亲和层析法（aflinitychromatography）是分离蛋白质的一种为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体(ligand）的分子能特异而非共价地结合。其基本原理：蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在，每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质，因此蛋白质的分离（separation），提纯（purification）和鉴定（characterization）是生物化学中的重要的一部分，至还没的单独或一套现成的方法能移把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来，因此往往采取几种方法联合使用。

原创作者：上海岑特生物科技有限公司