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如何祛除细胞上的支原体污染？

点击次数：132 发布时间：2023/12/1 10:14:39

细胞培养怕支原体污染，但有一些被污染的细胞不能被丢弃时该怎么办？接下来一起来了解一下吧

如何祛除细胞上的支原体污染？

据研究表明，约98％的支原体存在于细胞表面和细胞间隙。支原体直径约180~350nm，比细胞小很多，经低速离心与细胞分离。通过反复悬浮冲洗、离心，加上使用我们的Zell Shield，即可在细胞培养四代以内有效地祛除支原体。

什么是Zell Shield？

Zell Shield是一种链青霉素类复合抗生素，对细胞影响很小，可以有效抑制细胞培养中的支原体、细菌、霉菌、真菌等微生物增殖。普通的链霉素、青霉素对支原体没有效果。

具体是怎么操作呢？

1.先把被支原体污染的细胞消化下来，放入离心管离心，弃上清。再加入干净的PBS悬浮冲洗细胞、低速离心（300~500r/min）、弃上清，反复三次。这样可祛除细胞表面60％~70％的支原体，支原体还剩约30％~40％.

2.细胞加入含1％Zell Shield的新鲜培养基，传代培养。这时因培养基中Zell Shield的抑制作用细胞培养过程中，虽然细胞增殖，但残留的支原体无法增殖。细胞需再次传代时，把第二代细胞消化下来，离心，弃上清。加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清，反复三次，这时，细胞上残留的支原体大约已剩余为初污染量的10％左右。

3.细胞加入含1％Zell Shield?的新鲜培养基，传代培养。需再次传代时把第三代细胞消化下来，离心，弃上清。加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清，反复三次，可再次祛除60％~70％的残余支原体，通过冲洗、抑制、换液等操作，细胞中支原体的残留污染量大约只剩3％左右。

4.细胞加入含1％Zell Shield?的新鲜培养基，传代培养。

需再次传代时把第四代细胞消化下来，离心，弃上清。加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清，反复三次，可再次祛除60％~70％的支原体，此时，支原体残留量大约已低于1％.支原体的增殖亦有密度要求，用Zell Shield处理过四代的细胞，即便撤掉Zell Shield，只要保/证没有新的支原体人为再次带入，原有支原体也无法再增殖，随着传代，换液，支原体的老化、死亡，细胞中的支原体污染基本就彻/底解决了。

敲黑板，划重点啦！

1.每次传代时，重复三次对细胞悬浮冲洗步骤非常重要，操作要正确、规范，以达-佳效果！

2.在培养基中加入1％Zell Shield?抑制支原体增殖！

3.使用安全的血清、培养基等试剂，不再有新的支原体加入！

做到以上三点即可确保祛除支原体污染。

Zell Shield工作原理是什么？

支原体祛除剂Zell Shield（培养基用）是一种即用型链青霉素类的复合抗生素，在培养基中1%的浓度通过阻止原核生物DNA及蛋白的合成，抑制细胞培养中遇到的细菌、真菌、霉菌增殖，更可以有效、精-确地抑制支原体增殖，且对细胞基本安全。

品名：支原体祛除剂Zell Shield（培养基用）

供应商：远慕生物

规格：50mL/瓶

储存温度：-18℃

使用注意事项：实验室初次使用，注意分装，分装后的小包装Zell Shield?仍-20℃避光冷冻保存，现配现用。