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植物组织培养基的配制方法
点击次数：521 发布时间：2021/5/19 11:15:11
、母液的配制和保存
在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。为简便起见，通常先配制系列母液(stockso1utlon)，即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但刊以侏让各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保藏。般母液配成比所需浓度高10～100倍。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。配制时注意些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-、Ca2+、Mg2+和PO43-起溶解后，会产生沉淀，定要充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。药品应选职等较高的化学纯或分析纯。药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生索等母液，其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也可以混在起。母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。
下面以MS培养基制备为例，概述其制备方法，为MS基本培养基4种母液成分配制。
(1)大量元素母液可配成浓度10倍母液。用分析天平按表25称取药品，分别加100mL左右蒸馏水溶解后，再用磁力搅拌器搅拌，促进溶解。注意Ca2+和PO3-4易发生沉淀。然后倒入1000mL定容瓶中，再加水定容至刻度，成为10倍母液。
(2)微量元素母液可配成100倍的母液。用分析天平按表准确称取药品后，分别溶解，混合后加水定容至1000mL。
(3)铁盐母液可配成100倍的母液，按表称取药品，可加热溶解，混合后加水定容至1000mL。
(4)有机物母液可配成l00倍的母液。按表分别称取药品，溶解，混合后加水定容至1000mL。
(5)激素母液每种激素必须单独配成母液，浓度般配成1mg／mL。用时根据需要取用。因为激素用量较少，次可配成50mL或100mL。另外，多数激素难溶于水，要先溶于可溶物质，然后才能加水定容。
激素的配法如下：将IAA、IBA、GA等先溶于少量的95％的酒精中，再加水定容至定浓度。NAA可先溶于热水或少量95%的酒精中，再加水定容到定浓度。2，4D可用少量1mo1／L NaOH溶解后，再加水定容到定浓度。将KT和BA先溶于少量1mol／L的HCl中再加水定容。将玉米素先溶于少量95％的酒精中，再加热水定容到定浓度。配制好的母液瓶上应分别贴上标签，注明母液名称、配制倍数、日期及配lL培养基时应取的量。
二、培养基的配制及其灭菌
1．培养基的配制
用量简移取大量元素母液l00mL，用对应的移液管分别吸取微量元素母液10mL、铁盐母液10mL、有机物母液10mL，均置入1000mL定容瓶中，若不加任何激素，则为MS配养基；若需加激素按配方移取激素母液即可。
将已装母液的定容瓶用蒸馏水或自来水定容到1000mL，取1／3左右倒入小铝锅中加热。同时，称好30g蔗糖，称琼脂丝7g(或琼脂粉)，也倾入小铝锅中，边加热边搅拌，防止糊底。旺火煮开，再用文火加热，直至琼脂全鄙融化即清澈见底为度(若用琼脂粉，应加入100mL，左右的液体培养基，并搅拌均匀)。然后再倾入定容瓶内余下的液体培养基，摇晃均匀即可。
培养基配好后，要调整pH值。用0．1mol／L的NaOH或HCI液调成pH值5．8左右。在培养基配方不大变动的情况下可用经验法。可以将连续3次测定所加入的酸或碱液的平均值作为以后调整的用量值。调后注意定要摇动均匀，还要注意酸或碱液不要放置时间太久。
2．培养基的分装与灭菌
培养基配好后要趁热分装，l00mL的容器约装入30～40mL培养基，即1L培养基约装35瓶左右。太多则浪费培养基，太少不易接种和影响生长。但要根据培养对象来决定。如果培养时间较长时，应适当多装培养基；生根等短期培养时，可适当少加培养基。分装时不要把培养基弄到管壁上，以免日后污染。装后用封口材料包上瓶口，扎口后，写上培养基种类，准备灭菌。注意不能放置时间过长，以免产生污染。
分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力0.1lMPa。
具体操作方法为：打开锅盖，加水至水位线。把已装好培养基的三角瓶，连同蒸馏水及接种用具等放入锅筒内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出。然后盖上锅盖，对角旋紧螺丝，接通电源加热，当升至0．05MPa时，打开放气阀放气，气压指针回“0”，后关闭放气阀。当气压上升到0．1lMPa时，保压灭菌20～35min，到时停止加热。当气压回“0”后打开锅盖，取出培养基，放于平台上冷凝。灭好菌的培养基不要放置时间太长，多不能超过1周。
在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。为简便起见，通常先配制系列母液(stockso1utlon)，即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但刊以侏让各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保藏。般母液配成比所需浓度高10～100倍。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。配制时注意些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-、Ca2+、Mg2+和PO43-起溶解后，会产生沉淀，定要充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。药品应选职等较高的化学纯或分析纯。药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生索等母液，其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也可以混在起。母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。
下面以MS培养基制备为例，概述其制备方法，为MS基本培养基4种母液成分配制。
(1)大量元素母液可配成浓度10倍母液。用分析天平按表25称取药品，分别加100mL左右蒸馏水溶解后，再用磁力搅拌器搅拌，促进溶解。注意Ca2+和PO3-4易发生沉淀。然后倒入1000mL定容瓶中，再加水定容至刻度，成为10倍母液。
(2)微量元素母液可配成100倍的母液。用分析天平按表准确称取药品后，分别溶解，混合后加水定容至1000mL。
(3)铁盐母液可配成100倍的母液，按表称取药品，可加热溶解，混合后加水定容至1000mL。
(4)有机物母液可配成l00倍的母液。按表分别称取药品，溶解，混合后加水定容至1000mL。
(5)激素母液每种激素必须单独配成母液，浓度般配成1mg／mL。用时根据需要取用。因为激素用量较少，次可配成50mL或100mL。另外，多数激素难溶于水，要先溶于可溶物质，然后才能加水定容。
激素的配法如下：将IAA、IBA、GA等先溶于少量的95％的酒精中，再加水定容至定浓度。NAA可先溶于热水或少量95%的酒精中，再加水定容到定浓度。2，4D可用少量1mo1／L NaOH溶解后，再加水定容到定浓度。将KT和BA先溶于少量1mol／L的HCl中再加水定容。将玉米素先溶于少量95％的酒精中，再加热水定容到定浓度。配制好的母液瓶上应分别贴上标签，注明母液名称、配制倍数、日期及配lL培养基时应取的量。
二、培养基的配制及其灭菌
1．培养基的配制
用量简移取大量元素母液l00mL，用对应的移液管分别吸取微量元素母液10mL、铁盐母液10mL、有机物母液10mL，均置入1000mL定容瓶中，若不加任何激素，则为MS配养基；若需加激素按配方移取激素母液即可。
将已装母液的定容瓶用蒸馏水或自来水定容到1000mL，取1／3左右倒入小铝锅中加热。同时，称好30g蔗糖，称琼脂丝7g(或琼脂粉)，也倾入小铝锅中，边加热边搅拌，防止糊底。旺火煮开，再用文火加热，直至琼脂全鄙融化即清澈见底为度(若用琼脂粉，应加入100mL，左右的液体培养基，并搅拌均匀)。然后再倾入定容瓶内余下的液体培养基，摇晃均匀即可。
培养基配好后，要调整pH值。用0．1mol／L的NaOH或HCI液调成pH值5．8左右。在培养基配方不大变动的情况下可用经验法。可以将连续3次测定所加入的酸或碱液的平均值作为以后调整的用量值。调后注意定要摇动均匀，还要注意酸或碱液不要放置时间太久。
2．培养基的分装与灭菌
培养基配好后要趁热分装，l00mL的容器约装入30～40mL培养基，即1L培养基约装35瓶左右。太多则浪费培养基，太少不易接种和影响生长。但要根据培养对象来决定。如果培养时间较长时，应适当多装培养基；生根等短期培养时，可适当少加培养基。分装时不要把培养基弄到管壁上，以免日后污染。装后用封口材料包上瓶口，扎口后，写上培养基种类，准备灭菌。注意不能放置时间过长，以免产生污染。
分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力0.1lMPa。
具体操作方法为：打开锅盖，加水至水位线。把已装好培养基的三角瓶，连同蒸馏水及接种用具等放入锅筒内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出。然后盖上锅盖，对角旋紧螺丝，接通电源加热，当升至0．05MPa时，打开放气阀放气，气压指针回“0”，后关闭放气阀。当气压上升到0．1lMPa时，保压灭菌20～35min，到时停止加热。当气压回“0”后打开锅盖，取出培养基，放于平台上冷凝。灭好菌的培养基不要放置时间太长，多不能超过1周。
原创作者：上海岑特生物科技有限公司
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