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技术文章/ARTICLE

支原体污染的影响是什么？如何应对呢？

点击次数：549 发布时间：2021/5/6 10:01:10

细胞培养过程中，由于实验环境、操作者鼻腔口腔、实验器材等很多地方都有支原体的存在。因此，细胞发生支原体污染的频率很高。据美国数据统计，细胞发生支原体污染的几率在70%以上。

同时，由于支原体直径很小，仅在180nm~350nm之间，只有通过电镜才能看到。因此，支原体污染不易被实验者肉眼发觉。而支原体污染是个循序的过程，普通抗生素对其无效。因此，被支原体污染的细胞会持续受到影响，导致实验数据不准确。

支原体污染不仅是细胞培养中需要克服的现象，而且是制药、生物制品生产中需要加以避免的。支原体污染的影响是什么？

●抑制细胞增殖达50%

●影响免疫反应

●影响病毒增殖和感染率

●引起染色体畸变和易位

●干扰杂交瘤技术使被污染细胞在HAT培养基geng敏感

●在细胞壁上附着支原体会改变细胞壁完整性。

●降低电穿孔转染率达5%

总之，支原体污染影响细胞所有的代谢功能。

细胞被支原体污染，解决方案

方法：确认细胞已被支原体污染，终止试验，丢弃所有被污染的细胞和耗材。

重新复苏细胞，注意选用未被污染的细胞株、血清和培养基，并规范操作。

方法二：对于珍贵的，样品不可再得的细胞，或价格昂贵的种子细胞，不但无法丢弃，而且作为种子细胞，还需要彻底根除支原体污染。

此时，需选用特异性的支原体杀除剂，清除污染，保护细胞。

方法三：对于已耗费很多时间，大量扩增起来的细胞，或经过基因转染、体外刺激等大量工作处理过的细胞，如果发现细胞被支原体污染了，怎么办？此时由于期工作量巨大，使操作人员无法丢弃已有细胞。

但由于价格原因，又无法使用方法二提到的昂贵试剂杀除细胞上的支原体，

同时，实验人员还需要清除细胞上的支原体污染，让实验得以往下推进，以蕞终获得准确的实验数据。

此时，实验者可选用对支原体特效的抑制剂，通过对细胞的期处理，中期加药，逐步通过4代左右的培养，得以将支原体污染彻底清除，确保试验顺利推进，结果准确。

工作环境中支原体污染，解决方案

如果实验室的细胞经常发生支原体污染，则需考虑的污染源可能来以下几个方面：

1、细胞种子被污染，解决方法参见以上“方法二”和“方法三”；

2、细胞培养中，使用未经严格过滤祛除支原体的牛血清。

某些血清生产厂，为低价占市场同时还能获得充足利润，他们需要降低生产成本，所以会将生产中，成本蕞高的100nm过滤三次的步骤缩减，导致血清成为支原体的污染源。

(全球标准的血清生产规范为：粗血清需经七次过滤，蕞后三次为100nm加压过滤，可以清除支原体)；

此情况需详细考察血清供货商的业程度，通过索要《检测报告》等书面文件为血清获得geng多质量保证。同时，对业水平不高的血清供货商，适当延长血清试用期。

3、洁净台、细胞培养箱内部、培养箱水槽、液氮罐，培养间内部的水浴锅等环境被支原体污染，可对工作区域进行消毒。

总之，细胞培养中，支原体污染发生频繁。有时带来的危害会造成实验的巨大损失。应经常检测和及时排除支原体污染，让细胞在健康安全的环境下生长，为获得准确的实验结果，打下良好的基础。

原创作者：上海岑特生物科技有限公司