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技术文章/ARTICLE

实验室细胞培养被污染的处理方法

点击次数：186 发布时间：2023/7/17 10:13:18

　　实验室细胞培养中常见的生物污染包括细菌污染、霉菌污染、支原体污染、黑点污染、真菌污染和原生动物污染。

　　1.细菌污染

　　细菌在普通倒置显微镜下呈黑色和细砂状。根据感染菌的种类不同，可能会呈现不同的形状，培养液一般会变得浑浊、黄色，对细胞生长有明显影响。

　　2.霉菌污染

　　正常情况下，培养基在 37℃ 培养箱中培养两三天，在倒置显微镜下仍保持透明，无杂质。一旦出现絮状杂质，显微镜下可见丝状和团块状漂浮物，菌丝明显。此时，虽然细胞仍在生长，但它们的生命状态会在长时间后逐渐恶化。

　　3.支原体污染

　　支原体是隐蔽的污染物，不能通过过滤去除。显微镜下没有任何可见的支原体污染迹象，比如细胞病变和浊度或 pH 值变化（即使在严重污染的培养基中），这样就会导致我们产生错误的安全感。而在牛血清中，支原体是常见的微生物。

　　4.黑点污染

　　黑色的游动点能穿透滤膜并在空气中扩散。它们在低倍镜下显示为黑色圆点，在高倍镜下显示为可移动的黑色斑点。培养液也不浑浊，一般影响较小，因此细胞仍可使用。通常，黑点污染后，细胞生长良好，运动物体无明显增加，培养基的颜色和透明度无明显变化。在同一批血清培养的细胞中也可以发现类似的现象。

　　5.真菌污染

　　真菌污染后，培养基一般清澈，保持原色。细丝可以在显微镜下观察到。初，一些真菌类似于死细胞碎片，但其中许多清晰可见，看起来像珊瑚，比较容易区分。此外，它们会慢慢长出细细的黑色细丝，因为它们生长得比较慢，不像细菌那样容易被发现，一旦发现培养基被污染，它们将很难存活。

　　6.原生动物污染

　　原生动物污染后，细胞培养基变得轻微浑浊。在显微镜下，大量的小点来回移动。虽然此时细胞仍能生长，但繁殖速度减慢，细胞生长状态不好，边缘不清，变得不透明。原生动物与细胞形成共生关系。同时，原生动物与细胞竞争营养。这种共生现象非常普遍，但以细胞为主，因为原生动物的数量相对较少，因而对细胞的正常生长没有影响，只有当它们达到一定数量时，才终爆发成为恶性循环。

　　细胞培养过程中细胞受到污染的原因：

　　1，取放细胞时引起的污染

　　细胞培养过程中，取放细胞是基本的操作，培养房开关门的瞬间，环境中的微生物或多或少会进入培养箱中，而且内外温差导致内门冷凝水的产生，易吸附微生物，都是造成培养箱污染的风险因素。

　　2，灭菌不彻/底造成的二次污染

　　细胞培养过程中，因其它操作问题（如培养基泼洒，水盘污染等），造成培养房的大规模污染也时常会发生，此时就需要对培养箱进行灭菌消毒，常规的消毒（如紫外照射）只能达到表面消毒的效果，特别是对真菌等顽固性污染，无法进行彻/底灭菌，导致后续培养过程中细胞污染频发。