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大肠杆菌检测培养基的配方及原理
点击次数：225 发布时间：2023/6/15 10:32:50
本文主要对大肠杆菌微生物检测培养基的配方及原理进行了介绍，为化学实验从业人员提供参考！
1、 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)
原 理：月桂基硫酸钠，别名月桂醇硫酸钠，表面活性作用强，具有乳化作用。
一种优/质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等胰蛋白胨或胰酪胨 20g 提供碳源和氮源满足细菌生长的需求 。
配方：（g/L）
2、 煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤（Brilliant Green Lactose Bile Broth）
原理：胆盐（Bile Salt）：是一种胆酸的钠盐，是胆酸的羧基和甘氨酸或牛磺酸(C2H7NO3S)的氨基(C2H5NO2)，通过酰胺键结合而成。
① 可降低培养基与细菌细胞膜界面上的表面张力，使细胞膜紊乱，导致细菌自溶。
②肠杆菌科细菌在肠道内长/期与胆汁接触。对胆盐有一定的抵抗力。合适的胆盐量能促进该科细菌的生长。
③胆盐遇酸生成沉淀，使菌落色素不致扩散从而有利于鉴别。
④ 胆盐中含有一定量的胆红素、粘蛋白、色氨酸，对不受胆盐抑制的细菌生长有营养作用。
煌绿（亮绿）：抑制革兰氏阳性菌和大多数非沙门氏菌的革兰氏阴性杆菌，通常抑制发酵乳糖、蔗糖的细菌。煌绿和枸櫞酸钠对大腸菌的生长、菌体蛋白质的合成和糖的利用都有显著的抑制作用,以煌绿的作用为较强。枸酸钠能抑制大腸菌的呼吸,而煌绿的抑制作用则较弱。混合胆盐及硫代硫酸钠对大腸菌的上述代谢活动都没有抑制作用。
配方：（g/L）
用法：将蛋白胨、乳糖溶于约500 ml蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200 ml（将20.0 g 脱水牛胆粉溶于200 ml 蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975 ml，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3 ml， 用蒸馏水补足到1000 ml，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10ml 。121 ℃高压灭 15 min 。
3、 伊红美蓝琼脂(EMB)Eosin-Methylene Blue Agar
原理：
伊红美蓝琼脂含有伊红和美蓝两种苯胺类染料，它们可以抑制革兰氏阳性菌的生长。伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。
在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。
常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。
配方：（g/L）
用法：称取本品 37.4g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌 15分钟, 备用。
4、 EC肉汤 (E.Coli Broth)
用途：用于粪大肠菌群、大肠杆菌的测定(GB2008、SN标准)
配方：（g/L）
5、 营养琼脂斜面 营养琼脂（NA）Nutrient Agar
用途：细菌计数、不含糖，可作血琼脂基础和传代用(GB标准)。
配方：（g/L）
1、 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)
原 理：月桂基硫酸钠，别名月桂醇硫酸钠，表面活性作用强，具有乳化作用。
一种优/质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等胰蛋白胨或胰酪胨 20g 提供碳源和氮源满足细菌生长的需求 。
配方：（g/L）
2、 煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤（Brilliant Green Lactose Bile Broth）
原理：胆盐（Bile Salt）：是一种胆酸的钠盐，是胆酸的羧基和甘氨酸或牛磺酸(C2H7NO3S)的氨基(C2H5NO2)，通过酰胺键结合而成。
① 可降低培养基与细菌细胞膜界面上的表面张力，使细胞膜紊乱，导致细菌自溶。
②肠杆菌科细菌在肠道内长/期与胆汁接触。对胆盐有一定的抵抗力。合适的胆盐量能促进该科细菌的生长。
③胆盐遇酸生成沉淀，使菌落色素不致扩散从而有利于鉴别。
④ 胆盐中含有一定量的胆红素、粘蛋白、色氨酸，对不受胆盐抑制的细菌生长有营养作用。
煌绿（亮绿）：抑制革兰氏阳性菌和大多数非沙门氏菌的革兰氏阴性杆菌，通常抑制发酵乳糖、蔗糖的细菌。煌绿和枸櫞酸钠对大腸菌的生长、菌体蛋白质的合成和糖的利用都有显著的抑制作用,以煌绿的作用为较强。枸酸钠能抑制大腸菌的呼吸,而煌绿的抑制作用则较弱。混合胆盐及硫代硫酸钠对大腸菌的上述代谢活动都没有抑制作用。
配方：（g/L）
用法：将蛋白胨、乳糖溶于约500 ml蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200 ml（将20.0 g 脱水牛胆粉溶于200 ml 蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975 ml，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3 ml， 用蒸馏水补足到1000 ml，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10ml 。121 ℃高压灭 15 min 。
3、 伊红美蓝琼脂(EMB)Eosin-Methylene Blue Agar
原理：
伊红美蓝琼脂含有伊红和美蓝两种苯胺类染料，它们可以抑制革兰氏阳性菌的生长。伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。
在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。
常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。
配方：（g/L）
用法：称取本品 37.4g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌 15分钟, 备用。
4、 EC肉汤 (E.Coli Broth)
用途：用于粪大肠菌群、大肠杆菌的测定(GB2008、SN标准)
配方：（g/L）
5、 营养琼脂斜面 营养琼脂（NA）Nutrient Agar
用途：细菌计数、不含糖，可作血琼脂基础和传代用(GB标准)。
配方：（g/L）
原创作者：上海岑特生物科技有限公司
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