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技术文章/ARTICLE

细胞培养基中的浑浊，究竟是什么？

点击次数：594 发布时间：2020/12/8 11:17:45

如果排除了污染，细胞培养基中的浑浊通常被解释为金属、蛋白和其他培养基组分的沉淀。沉淀物可能损害细胞健康，因为它们通过螯合可移除养分和其他需要的组分，从而改变培养基的组成。沉淀物也是显微镜可见的，可能会干扰依赖成像的实验分析。

产生沉淀的可能原因

1、温度变化

在细胞培养中，温度是引起沉淀的主要因素。当遭遇温度的极端变化时，高分子量血浆蛋白会从溶液中析出；热失活和冻融循环能促进蛋白降解和沉淀；因为液体或重组成培养基在使用之间保持冷藏储存，盐可能沉淀，尤其是10x或其他浓缩的储存液。

2、失水诱导的浓度改变

如果培养基可能蒸发，培养基组分(包括盐) 的浓度将会增加，特别是培养基表面可能容易形成晶体沉淀。

3、钙盐

制备无血清培养基时，组分添加的顺序可能导致不可溶分子的形成。钙盐尤其容易沉淀，比如CaCl2和MgSO4在溶液中反应产生CaSO4晶体。高压灭菌和pH值不稳定会加剧这一问题。

4、金属补充物

铜、铁和锌等金属离子是细胞生长所必需的，是无血清培养基的重要补充物。培养系统中其他血清组分的缺失可能导致这些金属沉淀，为细胞形成有毒的环境。在较高pH环境下(一般>8时)，碳酸盐和氢氧根离子与铜离子、磷酸盐和氢氧根离子与铁离子、碳酸盐、磷酸盐和氢氧根离子与锌离子、氢氧根离子与镁离子易形成不溶性沉淀物；在氧化条件下，铜和锌更易于沉淀。

金属沉淀物及对应颜色：

硫化亚铜（I）：黑色

氧化铜（I）：黑色

氧化亚铁（I）：黑色

硫化亚铁（II）：黑色

氢氧化铜（II）：蓝色

磷酸亚铁（II）：蓝色

胱氨酸亚铜：蓝-灰色

碳酸铜（II）：蓝-深绿色

氯氧化铜（II）：蓝-绿色

醋酸铁（III）：棕色

碳酸钙：无色

氢氧化锌：无色

磷化亚铜（I）：灰-黑色

氧化镁：灰-绿色或棕-黑色

三氧化二铁（III）：红-黑色

氢氧化铁（III）：红-棕色

碳酸锰：玫瑰色

磷酸锌：灰色

磷酸钙：白色

磷酸镁：白色

氢氧化镁：白色

过氧化镁：白色

焦磷酸镁：白色

碳酸锌：白色

氧化锌：白色

硫化锌：白色

碳酸亚铜（I）：黄色

氢氧化亚铜（I）：黄色

过氧化锌：黄色

5、污染培养物浑浊可能是细菌或真菌污染造成的。

原创作者：上海岑特生物科技有限公司