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技术文章/ARTICLE

全血细胞培养染色体技术常用试剂配制

点击次数：437 发布时间：2020/8/14 9:04:40

    一、国内实验室应用试剂配制

    （一）培养液

    （1）RPMI1640培养液：称取RPMI培养基9.8g，碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml，加双蒸水至1000ml，调节 pH7.2～7.4无菌过滤冻存备用。

    （2）小牛血清商品：成都生物制品厂。

    （3）植物凝集素（PHA）：自制或成品（重庆药检所）。

    （4）pH调整液：5% NaHCO3溶液高压灭菌（8磅15min），0.1N稀盐酸液100ml。

    （5）秋水仙素：10mg/ml无菌过滤高压灭菌（8磅10min）。

    （6）磷酸缓冲液：pH7.4。

    磷酸氢二钠28.8g(H2O)、磷酸二氢钾2.67g(无水)，溶于1000ml双蒸水中，加肝素，终浓度为100u/ml。

    （7）Giemsa染色液：

    Giemsa粉剂　　　　　　　　　　　1g

    甘油　　　　　　　　　　　　　　66ml

    在研钵中，加入少量甘油油仔细研磨然后放甘油全部加磨，60℃温箱中保温2h，冷却后加入甲醇66ml。装入有色瓶中混合待用。染色时用pH7.4磷酸缓冲液稀释10倍，随配随用。

    （二）固定液

    （1）甲酸：冰乙酸3：1混合即用。

    （2）PBS缓冲液配制：

    NaCl　　 16g　　 Na2HPO4(12H2O) 　　5.65g

    KCl　　　0.4g 　KH2PO4　　　　　　　　0.4g

    加双蒸水至1000ml pH7.0。

    取5%胰酶（生理盐水配制）1ml加入50ml PBS液中（*终浓度为0.025%），4℃冰箱待用。

    二、细胞培养（Bhatl B和McGee JOD,1990）

    1．完全培养基

    RPMI　　　　　　　　　　　　 76.0ml

    胎牛血清　　　　　　　　　　20.0ml

    植物凝集素　　　　　　　　　 2.0ml

    抗生素/抗菌素溶液（100

原创作者：上海岑特生物科技有限公司