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技术文章/ARTICLE

人雄激素受体(AR)ELISA试剂盒操作步骤√岑特新闻

点击次数：663 发布时间：2018/7/9 11:17:15

中文名：人雄激素受体(AR)elisa试剂盒
英文名称:Human androgen receptor (AR) ELISA kit
供应商：古朵
规格：48t/96t
保存：2~8℃
有效期：6个月
种属/Organism：Human/人
指标名称/Other Names：AR
检测方法/Method：Sandwich-ELISA/双抗体夹心ELISA
检测范围/Detection Range：0.31-20 ng/mL
灵敏度/Sensitivit：0.19 ng/mL
检测样品/Sample Type：Serum, Plasma, Other biological fluids/血清、血浆等其它生物样品

检测原理：
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人AR抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的AR会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人AR抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人AR抗体与结合在包被抗体上的人AR结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，AR浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中AR的浓度。

标本收集:
血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。血浆：抗凝剂推荐使用EDTA，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃电冰箱内，避免反复冻融，6个月内进行检测,4℃保存的应在1周内进行检测。如果样本中检测物浓度高于标准品值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做预实验，以确定稀释倍数)。

人雄激素受体(AR)ELISA试剂盒使用方法：
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，每个孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分钟内配制)，酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。
3.弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约350μl /每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(临用前15分钟内配制)100μl，加上覆膜，37℃温育1小时。
5.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。
6.每孔加底物溶液100μl，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右(根据实际显况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止)。
7.每孔加终止液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。
9.实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。

注意事项：
1,封闭中的蛋白会非特异性将ELISA板子中没有结合包被物的位点封闭掉,这样之后加入的抗原或者抗体就不会再和板子发生非特异性的结合.使ELISA的结果更加的准确品
2，固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
3，包被抗体的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，蛋白质包被的*适浓度需进行滴定然后观察阳性标本的OD值。
4，酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定，然后再固定其它条件，*后在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
5， ELISA试剂盒酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，如 TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。

原创作者：上海岑特生物科技有限公司