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如何配置TTC染色液(2%)

点击次数：1111 发布时间：2017/9/12 16:29:32

如何配置TTC染色液(2%)

    中文名：TTC染色

    原    理：脂溶性光敏感复合物

    作    用：检测种子的生存能力

    TC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的甲臜，用来表示细胞的活力。配制多为2%，染色要避光，37度条件下，它是评价脑缺血损伤常用的指标。

    TTC染色：

    1原理：TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，1894年首次合成用来检测种子的生存能力，1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。

    2 取脑：可麻醉后直接取脑或经生理盐水灌注后取脑。因为脑组织未用多聚甲醛固定，所以较软，取脑时更应仔细，保持大脑的完整性。

    3 －20度冰箱中速冻20分钟左右，便于切片。

    4 切片：一般切成5－6片，每隔2mm切一片。刀在脑前极与视交叉连线中点处；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。（参考：张均田，主编。现代药理试验方法）。如果需计算面积的话，应切得均匀或用专门的脑槽。

    5将切片置于TTC中，常规浓度为2%，也有用1%或更低浓度的。

    6用锡箔纸盖住后，放入37C温箱15～30min，不时翻动脑片，使均匀接触到染色液。也可以用将脑片放入多孔板，再滴入TTC，覆以圆形盖玻片使均匀染色。

    7 染色后效果：为皮层下梗死。

    注意事项：

   1、 Leagene TTC Stain（2%）对人体有轻微刺激性，请注意小心防护。

    2、取脑时应仔细保持大脑的完整性。

    3、如果染色效果不佳，应适当延长染色时间。

    4、样本越新鲜越好，为了防止正常心肌及脑组织的酶活性减弱或消失，应尽快染色。

原创作者：上海岑特生物科技有限公司