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多肽常用的几种水解方法

点击次数：292 发布时间：2022/10/20 10:28:35

　　虽然多肽合成的氨基酸组成分析方法较多，且趋向更灵敏、更精/确、更简便、更快速，但还没有一种方法可以单独适用于所有氨基酸残基的检测，并且很多因素如温度、时间、水解试剂、水解方法及多肽合成样品中添加剂等对水解程度均有影响。常用的水解方法作简要介绍如下:

　　1.酸性水解

　　酸性水解是应用为广泛水解方法，可以使大多数氨基酸残基完/全水解，通用的水解剂是6 mol/L HCI。

　　条件:6 mol/L HCI、真空、110℃.水解时间为20-24h。即可用于液相水解模式也可用于气相水解模式。但在该条件下，天冬酰胺和谷氨酰胺分别被完/全水解为天冬氨酸和谷氨酸，色氨酸则被完/全破坏，半胱氨酸先用二硫代二丙酸、4一乙烯呲啶或碘代乙酸保护后水解方可测定，酷氨酸部分被水解液所破坏，丝氨酸和苏氨酸被部分水解。有些脂肪族氨基酸残基间的肽键难于裂解，可以通过延长水解时间如水解92h甚至120h来解决。

　　2.碱性水解

　　碱性水解一般选用NaOH和KOH作为水解剂。该水解方法是HCI水解的互补法。因为碱水解时，多数氨基酸遭到破坏或外消旋化，仅色氨酸是稳定的。所以此法仅/限于测定色氨酸。

　　3.酶水解

　　用一组蛋白酶水解肽链，特别适用于对化学水解敏感的氨基酸如天冬酰胺和谷氨酰胺的测定。水解过程中氨基酸不发生消旋化，几乎可以保持所有的组成氨基酸不被破坏。但是因为酶水解条件温和，对天冬酰胺、谷氨酰胺等皆无破坏作用，且反应需要较长的时间，水解不完/全，酶本身也是蛋白质，对样品的测定结果可能会有干扰。

　　微波辐射能水解，一般情况下190℃微波水解15分钟肽类即可完/全水解，导致完/全水解的时间大大缩短。在微波辅助酸水解和微波辅助酶水解中，水解时间可从过去的几十小时缩短到几十分钟。

　　总之，多肽合成药物水解方式应根据其产品的性质、研究目的、可获得的样品量及少实验室的具体条件采取适宜的水解方法。

原创作者：上海岑特生物科技有限公司