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沙门氏菌常用培养基的配方及原理
点击次数：538 发布时间：2022/8/11 10:56:55
1、沙门氏菌简介
沙门氏菌病的病原体。属肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌。已发现的近一千种（或菌株）。菌体大小（0.6～0.9)×（1～3)微米无芽胞，一般无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外，大多有周身鞭毛。营养要求不高，分离培养常采用肠道选择鉴别培养基。生化反应对本属菌的鉴别具有重要参考意义。不液化明胶，不分解尿素，不产生吲哚，不发酵乳糖和蔗糖，能发酵葡萄糖、甘露醇、麦芽糖和卫芽糖，大多产酸产气，少数只产酸不产气。VP试验阴性，有赖氨酸脱羧酶。DNA的G+C含量为50～53%。对热抵抗力不强，在60℃15分钟可被杀死。在水中存活2～3周。
2、检测流程见表1
3、培养基原理
微生物检测培养基
微生物检测培养基
3.1 缓冲蛋白胨水Buffered Peptone Water
用途：用于沙门氏菌、阪崎杆菌增菌培养（GB2008标准）
用途：用于沙门氏菌、阪崎杆菌增菌培养（GB2008标准）
配方：（g/L）
用法：称取本品20.0g ,加热溶解于1000ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟备用。
3.2 四硫磺酸盐煌绿增菌液基础(TTB) Tetrathionate Broth Base
用途：用于沙门氏菌选择性增菌培养，需加入煌绿和碘液。
配方：（g/L）
用法：称取本品93.55g,溶解于1050ml 蒸馏水中,加热煮沸,临用加入 20% 碘液 20ml,0.5% 煌绿 2ml,现配现用,不宜久置。
3.3 亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）Selenite Cystine Broth
用途：用于沙门氏菌选择性增菌培养（GB、SN标准） 。
配方：（g/L）
用法：称取本品23.0克,加热溶解于1000ml蒸馏水中,无菌操作分装于灭菌三角瓶或试管中备用。当天制备当天使用，无需高压灭菌。
3.4 亚硫酸铋琼脂（BS）（GB4789）
3.4 亚硫酸铋琼脂（BS）（GB4789）
配方（g/L）：
用法：将三种成分加入300 ml蒸馏水（制作基础液），硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20 ml和30 ml蒸馏水中，柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一 20 ml和30 ml蒸馏水中，琼脂加入 600ml蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。冷至 80 ℃左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀，倒入基础液中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。调节 pH，随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷至50 ℃～55 ℃。加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿。
注：本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处，超过48h会降低其选择性，本培养基宜于当天制备，第二天使用。
3.5 XLD培养基XyloseLysineDeso
用途：选择性培养基，主要用于分离志贺氏菌属，亦可用于分离沙门氏菌。
配方：（g/L）
用法：称取本品5.7g,加热搅拌溶解于100ml蒸馏水中,不要过分加热，冷至 50℃左右时,倾入无菌平皿,部分开盖干燥 2h,然后盖上，备用。无需高压灭菌。在 24小时内使用。
3.6 HE琼脂
用途：用于沙门氏菌的选择性分离培养（GB标准）
配方：（g/L）
原理：溴麝香草酚兰和酸性复红为pH指示剂，发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为蓝绿色。
用法：称取本品 95.8g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中, 冷至50-55℃时,倾入无菌平皿,本培养基不需要高压灭菌。
生化培养基。
3.7 三糖铁（TSI）琼脂Triple Sugar Iron Agar
用途：生化培养基，用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选（GB2008标准）
配方：（g/L）
用法：称取本品 64.5g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,加热煮沸 1分钟,分装于 16mm× 150mm试管,121℃高压灭菌 15 分钟制成斜面长 4-5cm,底部长2-3cm。
3.8 赖氨酸脱羧酶试验培养基
用途：用于细菌检验中赖氨酸脱羧酶试验。
配方：（g/L）
用法：除赖氨酸以外的成分加热溶解后, 分装每瓶100 ml，分别加入赖氨酸。L- 赖氨酸按0.5％加入， DL-赖氨酸按1 ％加入。调节 pH。对照培养基不加赖氨酸。分装于无菌的小试管内，每管0.5 ml， 上面滴加一层液体石蜡，115 ℃高压灭菌 10 min 。
3.9 尿素琼脂（pH 7.2）
用途：生化培养基，用于细菌脲酶检测（GB、SN标准）
配方：（g/L）
用法：称取本品 2.1g,加热搅拌溶解于 95ml 蒸馏水中,121 ℃高压灭菌 15 分钟,冷至 50-55 ℃,加入无菌的 40% 尿素水 5ml, 混匀,分装试管, 放成斜面备用。注:本批粉末颜色呈粉红色。
3.10 糖发酵管
配方：
制法：
①葡萄糖发酵管按上述成分配好后，调节pH。按0.5％加入葡萄糖，分装于有一个倒置小 管的小试管内，121℃高压灭菌 15 min 。
②其他各种糖发酵管可按上述成分配好后, 分装每瓶100 ml，121℃高压灭菌15 min.另将各种糖类分别配好10％溶液，同时高压灭菌。将 5 mL糖溶液加入于100 mL培养基内，以无菌操作 分装小试管。
注：蔗糖不纯, 加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。
试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36 ℃±1 ℃培养, 一般2d～3d。迟缓反应 需观察14d ～30d 。
原创作者：上海岑特生物科技有限公司
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